Metilação de Ácidos Graxos para Cromatografia

Quando se deseja analisar amostras de ácidos graxos por cromatografia gasosa, faz-se necessária a metilação destes ácidos, pois se injetados diretamente no equipamento, eles aderem à parede da coluna causando danos irreparáveis. A metilação converte os ácidos graxos em metis ésteres, permitindo sua injeção no cromatógrafo.

Procedimento Link para o cabeçalho

Procedimento adaptado por Pimenta¹ a partir do método de Hartman².

1º: Saponificação Link para o cabeçalho

• Adicione 100 µL de amostra à um tubo de ensaio;

• Colocar 2 mL de solução NaOH (0,5 M em metanol);

• Fechar o tubo, agitar, aquecer por 5 min com agitação durante;

• Resfriar.

2º: Metilação Link para o cabeçalho

Esta etapa utiliza a solução metilante (solução de cloreto de amônio e ácido sulfúrico em metanol). Sua preparação é descrita por Hartman ².

• Adicionar 3 mL da solução metilante;

• Agitar e aquecer por 5 min;

• Resfriar.

3º: Extração Link para o cabeçalho

• Adicionar 2 mL de hexano (ou qualquer outro solvente orgânico leve);

• Agitar;

• Adicionar 1 mL de solução saturada de NaCl para facilitar a separação;

• Centrifugar.

Após a centrifugação, a parte inferior do tubo conterá uma fase aquosa e o sobrenadande será a fase orgânica contendo os metis ésteres.

Referências Link para o cabeçalho